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PrimeSurface®論文紹介

Transcriptional Up-Regulation of FBXW7 by KCa1.1 K+ Channel Inhibition
through the Nrf2 Signaling Pathway
in Human Prostate Cancer LNCaP Cell Spheroid Model

Susumu Ohya, Hiroaki Kito, Junko Kajikuri , Yohei Yamaguchi and Miki Matsui

Int. J. Mol. Sci. 2024, 25, 6019. | https://doi.org/10.3390/ijms25116019

Copyright © Authors 2024 Licensee MDPI, Basel, Switzerland.
This article is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License (CC BY).

KCa1.1阻害によるFBXW7転写活性化と
前立腺がんスフェロイドモデルにおける抗腫瘍作用

背景

腫瘍抑制遺伝子FBXW7は多能性幹細胞マーカーのタンパク質分解を促進することでがん幹細胞特性を低下させることが知られています。一方、KCa1.1（カルシウム活性化カリウムチャネル）は、がん細胞の増殖やがん幹細胞性に関与し、その阻害が腫瘍抑制効果を示すことが報告されています。 著者らはこれまでの複数のがん種について行われた研究においてFBXW7がKCa1.1タンパク質分解の必須調節因子であることを明らかにしましたが、KCa1.1阻害がFBXW7の転写調節を介してがん幹細胞性に及ぼす分子機構や細胞内シグナル経路の詳細はまだわかっていません。

本研究の成果

本研究は、KCa1.1を発現する癌細胞において、KCa1.1阻害を介したFBXW7発現の調節および関連シグナル伝達カスケードを調べることを目的としました。著者らはヒト前立腺がんLNCaP細胞の3Dモデルにおいて、Ca2+活性化KチャネルKCa1.1の阻害がAkt-Nrf2シグナル経路を介してFBXW7の転写活性を促進することを見出しました。
本研究ではPrimeSurface®を用いて作製されたスフェロイドが用いられました。遺伝子発現解析やタンパク質発現解析の結果、KCa1.1阻害剤の処理によりFBXW7の発現が有意に上昇し、Nrf2の核内移行が抑制されることが共焦点顕微鏡観察より確認されました。また、 siRNAを介して、FBXW7の発現が抑制され、これらの結果からFBXW7転写制御に重要な役割を果たすことが示唆されました。これらの結果は、KCa1.1阻害によるがん幹細胞性抑制のメカニズム解明に寄与するとともに、新たな治療ターゲットとしての可能性を示しています。

Figure 1. Effects of the treatment with PAX on FBXW7 expression and effects of Akt and Nrf2 activation on the KCa1.1 inhibition-induced up-regulation of FBXW7 in the 3D spheroid model of LNCaP cell Figure 1.
Effects of the treatment with PAX on FBXW7 expression and effects of Akt and Nrf2 activation on the KCa1.1 inhibition-induced up-regulation of FBXW7 in the 3D spheroid model of LNCaP cell
Figure 8. Effects of the treatment with PAX on c-Myc expression in the LNCaP spheroid model. Figure 8.
Effects of the treatment with PAX on c-Myc expression in the LNCaP spheroid model.

本研究におけるPrimeSurface®の使用方法

プレート： PrimeSurface® 96Uプレート
細胞： LNCaP cells、播種密度：1 × 104 cells/well、培地： RPMI 1640 medium (10% FBS)
方法と結果（一部ご紹介）：
3Dスフェロイド培養は2D培養より生体環境を近い状態を再現できるので、実験にはスフェロイドモデルを使用。リアルタイムPCR、ウェスタンブロットにより遺伝子発現とタンパク質発現を調べ、12時間KCa1.1阻害剤であるPAX処理するとスフェロイドにおいてFBXW7の発現が有意に上昇し、また多能性マーカーであるc-Mycのタンパク質発現が顕著に低下した。またArkとNrf2シグナルアクチベーターSC79とNK252もそれぞれ処理してFBXW7のタンパク質発現の確認を行い、Akt-Nrf2シグナル経路を介したKCa1.1の阻害によりFBXW7の転写活性が促進され、タンパク質分解が促進され、がん幹細胞のstemness抑制が示唆された。

※詳細は 論文 をご参照ください　

品番 品名 ウェル数 色 ウェル
底形状		 ウェル
容量		 包装 参考単価
（円）		 参考ケース
価格（円）
MS-9096U PrimeSurface®
96Uプレート		 96 透明 U 300 μL 1/包, 20/ケース 1,730 34,600

注記

  • 放射線滅菌済
  • 保管温度: 室温, 有効期限: 製造後2年
  • 参考価格（本体価格・税抜）

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